FLUJO DE PROCESO DE ANALISIS DE PCR CON KITS DE PRUEBA DE ADN - Procedimiento Paso a Paso

Extracción

  • Muestra de animal (menos de 10mg) – Homogeneizar.
  • Agregue 40μl de GenCheck.
  • Vórtice.
  • Centrifugar a 10000rpm durante 30 segundos todas las muestras.
  • Colocar las muestras en el Bloque térmico (agitador térmico) a 98-100°C durante 10 minutos.
  • Permanecer en hielo durante 1 minuto.
  • Centrifugar a 10000rpm durante 5 minutos.
  • Transfiera 5μl de sobrenadante de las muestras a un nuevo tubo de 1.5 ml.
  • Agregue 95μl de agua libre de RNasa a cada muestra.

Amplificación

Para Muestra

  • Prepare la mezcla de PCR en un tubo de 1.5 ml de la siguiente manera:

PCR enzima 5μl X
RNase free water 2μl X
Primer Solution 2μl X.

  • Lleve la mezcla de PCR al vortex.
  • Coloque 9μl (mezcla de PCR) en cada tubo de PCR.
  • Coloque 1μl de muestra de ADN o control positivo en cada tubo de PCR.
  • Lleve de Nuevo la mezcla al Multispin..
  • Colocar las muestras en el Termociclador de PCR.

MUY IMPORTANTE Notas:

  • El conjunto enfriador (PCR Cooler set), la enzima de PCR y el control positive deben congelarse (almacenar a - 20°C )
  • Todos los reactivos, por ejemplo, el agua sin ARNasa y las soluciones de cebador, DEBEN SER REFRIGERADOS (almacenados entre +2 °C y +8 °C) o en temperatura FRÍA
  • Coloque las rejillas para tubos de 1.5 o 2.0 ml encima de una bolsa de hielo durante el uso.

Identificación

IDENTIFICACIÓN de los patógenos del camarón:

  • Prepare la mezcla de latex (en un tubo de 1.5ml):

         Solución de latex     1.5ul X
     Dilution Buffer     20ul X

  • Lleve la mezcla de latex al Multispin
  • Ponga 21.5μl de la mezcla de latex en un tubo despues de la PCR.
  • Despues de esto, coloque una tira C-PAS en cada tubo de PCR.
  • Espere 10 minutos.
  • Y finalmente, IDENTIFIQUE visualmente los PATÓGENOS DEL CAMARÓN que aparecen como líneas AZULES en la tira C-PAS o colocando la(s) tira(s) C-PAS en la tarjeta C-PAS o el LECTOR de imágenes.